(2)在离心管中研磨叶片,留意样品不能在空气中消融,留意离心管的温度并 及时放入液氮中速冻;
(3)每支离心管中参加500ul改进CTAB溶液,震动使其混合均匀,静置10分 钟;
(3)室温3000g离心2分钟,在超净作业台中倒掉无菌水,留意别倒掉种子, 重复进行五次洗刷进程;
(4)参加%琼脂糖悬浮种子,用移液器均匀涂在50ug/m1卡那霉素100ug
/ml头砲菌素的MS固体培育基板上,每个板3ml,晾十五分钟,等水被板吸干后 再封膜;
(1)小摇:在超净作业台中取出无菌离心管,参加4ml纯洁LB液体培育基,加 入4ul 50mg/m1浓度的卡那霉素,参加8ul 10mg/ml浓度的利福霉素,参加阳性 菌菌液,摇匀;在摇床中2&C培育2天;
(2)大摇:在250ml三角瓶中参加150ml纯洁LB液体培育基,参加150ul 50mg/m1浓度的卡那霉素,参加300ul 10mg/m1浓度的利福毒素,参加菌液,过 夜摇菌。
(1)1L超纯水中参加10g蔗糖及40ul表面活性剂Silwet L-77,磁力加热搅 拌器拌和均匀;
(2)大摇后的菌液用分光光度计测0D600,用离心后的上清液作为对照,菌液0。600在~之间时,可以直接进行下一步;
(3)将菌液倒入50ml圆底离心管中,常温4000g离心10分钟,搜集菌株;
(5)用于摇菌的三角瓶,侵染用的瓶子、50ml插口圆底离心管及剩余的侵染液 与菌液上清均需髙温髙压灭菌。
侵染后的拟南芥苗正常培育,30地利收取第一批种子,40地利收取第二批 种子,晒干厂10天。
(1)将种子倒入10ml离心管中,加满拟南芥种子消毒液(%SDS、%NaC10),均 匀打散种子,手摇振动15分钟;
(8)每支离心管中参加400ul70%乙醇,震动洗刷沉积,12000rpm离心5分钟, 重复两次,晒干后每个离心管中参加50ul超纯水待用;
(2)将悉数的花全浸到侵染液中,悉数的花均需浸湿,若花无法碰到侵染液, 则用戴手套的手浸湿,每盆浸湿2分钟;